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Myc tag Nanobody Agarose Beads
  • 產(chǎn)品貨號:
    BN20548
  • 中文名稱:
    Myc tag Nanobody Agarose Beads
  • 品牌:
    Biorigin
  • 貨號

    產(chǎn)品規(guī)格

    售價

    備注

  • BN20548-500ul/25T

    500ul/25T

    ¥2800.00

  • BN20548-1ml/50T

    1ml/50T

    ¥5200.00

產(chǎn)品描述

產(chǎn)品描述:偶聯(lián) anti-Myc tag 納米抗體的瓊脂糖珠用于免疫沉淀 Myc tag(EQKLISEEDL)的融合蛋白。 

產(chǎn)品優(yōu)勢 

? 沒有普通抗體的輕鏈和重鏈; 

? 高親和力:解離常數(shù)達到 nM-pM 級別; 

? 高載量:20ul 的 beads 懸液可以結合 2-5ug Myc tag 的融合蛋白; 

? 較短的孵育時間,結合 30-120 min 即可; 

應用范圍  

     可用于免疫沉淀(IP)/免疫共沉淀(CoIP)、染色質(zhì)免疫沉淀(ChIP)/RNA 結合蛋白免疫沉淀(RIP)、 酶活性測定、質(zhì)譜分析等;

特異性  

     可以結合 Myc tag 的融合蛋白。 

產(chǎn)品特性 

     存儲緩沖液:PBS(含有 20%乙醇)。 

     保存條件:可在 4℃保存至少 1 個月,在-20 度或-80℃保存 1 年,避免高速離心,干燥和反復凍融。

實驗原理

image.png

實驗步驟: 

     收集細胞: 每個免疫沉淀反應大約使用 106-107 的哺乳動物細胞(約一個 10 厘米培養(yǎng)皿)表達綠色熒光蛋白融合蛋白。吸出生長培 養(yǎng)基、向培養(yǎng)皿中加入 2 毫升預冷的 PBS 洗滌細胞 2 次,利用細胞刮或胰酶消化的方法收集貼壁細胞,細胞轉移到離心 管,500 g 離心 3-5 分鐘并丟棄上清液。 

細胞裂解: 

     1.用 500 ul 預冷的裂解緩沖液重懸細胞,在裂解緩沖液中加入蛋白酶抑制劑(自備)。對于膜蛋白或核/染色質(zhì)蛋白, 可使用 RIPA 裂解液(貨號:BN25012)中加入蛋白酶抑制劑(貨號:BN25002)。 

     2.把離心管放置在冰上 30 分鐘,可以每 10 分鐘充分吹打一次。 

     3.細胞裂解產(chǎn)物在 4℃,20,000 g 條件下離心 15 分鐘,轉移裂解產(chǎn)物到一個新的預冷管中,丟棄沉淀。注意:此時細胞 裂解產(chǎn)物可以放在-80℃進行長期儲存。 平衡珠子:

     4.振蕩混勻 Myc tag-Nanobody-Agarose Beads,吸取 20ul beads 懸液到 500 ul 預冷的裂解緩沖液中,在 4 ℃,2,500  g 條件下離心 3 分鐘,丟棄上清液。(此步驟可選)

結合蛋白  

     5. 將細胞裂解產(chǎn)物加入到平衡的 Myc tag-Nanobody-Agarose Beads 中(如果未做第 4 步,可在細胞裂解產(chǎn)物中直接加入 20ul beads 懸液),在 4 ℃冷柜中的旋轉混合儀上結合 30-120 min。如果需要,保存 50 ul 的裂解產(chǎn)物進行免疫印跡分析。 

     6. 在 4 ℃,2,500 g 條件下離心 3 分鐘,丟棄上清液。

清洗珠子:  

     7. 用 500 ul 預冷的裂解緩沖液中洗滌 Myc tag-Nanobody-Agarose Beads,在 4 ℃,2,500 g 條件下離心 3 分鐘,丟棄 上清液并重復洗滌 2 次。(可選:在第二次洗滌的步驟中增加鹽濃度到 500 mM)。 

洗脫蛋白: 

方法一: 

     8. 加入 20ul 2X SDS-sample buffer 重懸 Myc tag-Nanobody-Agarose Beads。在 95℃條件下加熱 10 min,把免疫沉淀 復合物從珠子上游離出來,然后在 4 ℃,2,500 g 條件下離心 3 分鐘收集上清,進行免疫印跡分析。 

方法二: 

     9. 替代步驟 8 的可選步驟:加入 50ul 0.2 M pH2.5 的甘氨酸洗脫結合的蛋白,建議孵育時間 30 秒,并不斷混勻,隨后離心,轉移上清液到新管中,為了中和酸性的甘氨酸,需添加 5ul 1.0 M Tris(pH10.4)。注意:為了提高洗脫效率可 以重復這一步。 

方法三: 

     10. 替代步驟 8 或 9 的可選步驟:也可以加入過量的 Myc tag 的多肽進行洗脫。

產(chǎn)品效果:

image.png

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